样品中的蛋白质通过变性处理,原有构像发生改变,蛋白质肽链松散开,从而使原来埋藏于蛋白质内部的巯基(-SH)暴露,所有游离巯基(R-SH)与DTNB反应生成黄色可检测的2-硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB)和混合二硫化物(R-S-TNB),TNB在412nm处有强吸收峰,通过酶标仪测定此处的吸光度,并以谷胱甘肽为标准品,可计算出样品中总游离巯基含量。
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